微衛星分型

      微衛星（microsatellite analysis）即短串聯重復序列(Short tandem repeat，STR)，是由幾個堿基對作為核心單位，串聯重復形成的一類DNA序列，由于核心單位重復數目的變化，構成了STR基因座的遺傳多態性。它分布于人類整個基因組，平均每15kb就存在一個STR基因座。人類基因組內已發現了七千個以上的STR位點。研究者只需在目標基因座設計一對或多對引物 , 通過 PCR 反應從模板 DNA 中將該基因擴增出來 , 然后使用測序儀進行電泳分離分析即可。它具有分布廣泛，易于檢測，信息量大，有高度多態性并遵循孟德爾共顯性遺傳等優點。目前STR分析已廣泛應用于遺傳制圖、連鎖性分析、親子鑒定、疾病基因定位和物種多態性研究等諸多領域。

本公司具有豐富的STR分析檢測經驗，結果可靠、快速。

一 、分型原理

利用熒光標記的PCR引物對多個微衛星多態位點進行擴增，然后采用高分辨率膠電泳(如用于測序的毛細管電泳等)對擴增片斷進行分離，通過熒光檢測系統（如ABI測序儀）確定擴增片斷的長度，實現對微衛星多態位點的分型。

我公司采用ABI 3730測序儀對STR進行精確的DNA片段分析，提供完整解決方案：

· 實驗方案的設計，包括熒光標記的選擇，引物的設計、合成和標記、內標的選用等等；

· 完成熒光 PCR，并在測序儀上完成電泳掃描，數據采集。  

· 用專業軟件對分型數據進行處理分析，提供產物片段大小、數量多少的信息數據。

· 我們最終提供微衛星座位PCR產物全自動檢測及分型結果。

二、 服務流程

   1、客戶收集標本(血液或組織等標本)，并提取DNA。

   2、確定STR位點，設計實驗方案，包括熒光標記的選擇，引物的設計、合成和標記、熒光分子量內標的選用等等。

   3、按照所設計的實驗方案完成熒光PCR，利用瓊脂糖電泳檢測結果；若PCR產物特異性不夠，將進行優化。

   4、PCR產物通過測序儀電泳檢測，獲得擴增片段相關數據

   5、用GeneMapper 4.0等軟件對收集到的數據進行處理分析，將產物片段大小、數量多少的信息轉化成直觀準確的波形圖譜，為下一步進行關聯分析或連鎖分析等遺傳分析提供可靠的數據。

三、 樣品要求

        1. 基因組DNA：至少100 ng DNA樣品（每個多態性位點需樣品3-5 ul，濃度為30~50 ng/ul）；提供樣品類型、DNA溶液濃度和純度值，以及可能殘留的抑制劑成分。樣品最好溶解在ddH2O中，如果不是，請寫明溶解液成分。
    2. PCR產物：產物要通過預實驗的電泳檢測，特異性要好。
    3. 如需設計引物，請提供目的片段序列或者微衛星檢測位點，引物設計好后需客戶確認。

四、提供結果

1. 提供原始數據圖譜（fsa格式）

2. 各峰的相對分子量（Excel格式）

五、注意事項

1. 關于樣本質量：在對微衛星標記進行基因掃描時，經常會出現某些樣本的某些位點無法檢出，這通常與樣本DNA的質量有關，可以通過提高樣本DNA的質量來避免，但盡管如此，對于每一個樣本，尤其是進行大量位點全基因組掃描的樣本，仍會有一定比例的未檢出現象存在。

2. 關于微衛星位點選擇：由于只有雜合子的微衛星位點可以提供有效的信息，因此在選取微衛星標記時，一定要選取雜合度高的位點。