基因合成是指在體外人工合成雙鏈DNA分子的技術,與寡核苷酸合成有所不同。寡核苷酸合成的為單鏈DNA,所能合成的最長片段僅為100nt左右,而基因合成的則為雙鏈DNA,所能合成的長度范圍達50bp~12Kb。
我公司擁有成熟的基因合成技術,可根據客戶要求,以具競爭力的價格和快速的交貨周期提供全基因合成服務及相關服務。合成的基因可以根據客戶的需求連接到不同的載體上,最終提供的產品包括基因合成報告、測序圖譜、質粒結構圖、DNA質粒以及含有該質粒的菌株
一、應用領域:
1. 需經過密碼子優化以提高外源表達量的基因
2. 從組織樣品不易獲得,但序列已知的基因
3. 需要特定突變的基因
4. 無法通過釣魚法獲得,或cDNA 文庫中不表達、豐度極低、很難通過 PCR 擴增獲取的基因
5. 用于微芯片的大量cDNA
6. 自然界中還不存在對應蛋白的新基因
二、服務特色:
1. 免費提供基因的參考設計方案,包括設計酶切位點,密碼子優化等
2. 基因合成周期短,嚴格按照與用戶簽定的基因合成服務協議和保密合同執行
3. 能合成長度達 10 kb 的基因
4. 基因克隆到用戶指定或提供的表達載體上
5. 質量可靠,提供 DNA 測序結果,保證所合成的基因序列 100% 準確
三、服務流程:
1. 序列分析:客戶提供基因序列信息,確定使用何種酶切位點克隆、克隆到何種載體等等,我公司根據序列情況設計基因合成方案,傳至客戶確認。
2. 簽訂合同:經分析確認達成一致意見后,簽訂基因合成服務合同與保密協議??蛻粜桀A付 50% 的合成費用,本公司方開始合成。交貨期也從即日開始。
3. 引物設計與合成:設計Oligo合成方案,在全自動合成儀器上進行單鏈的化學合成。
4. 片段拼接:通過OVER-LAP的PCR,把單鏈Oligo拼接成雙鏈的全長基因。
5. 克?。簩?/span>PCR產物酶切、純化,連接到質粒中,將質粒轉入細胞株培養。
6. 篩選及驗證:提取陽性克隆進行DNA測序,確認插入片段的準確性。對可能存在的錯誤位點用定點突變的方法加以改正,再經測序驗證。
7. 發貨:合成完畢后,本公司通知客戶,收到全部貨款后開始發貨。
提交的產品及資料:基因合成報告、測序圖譜/序列、質粒結構圖、包括裝載目的基因的質粒以及含有該質粒的菌株。
四、免費密碼子優化服務:
對于密碼子優化服務,在提供需要優化和合成的基因序列的同時,我們還需要如下訊息:
1. 需要合成的蛋白或 DNA 序列
2. 宿主表達系統
3. 兩端的限制性酶切位點
4. 優化后的序列中需要避免的限制性酶切位點
5. 優化后的序列中需要保留的限制性酶切位點
五、注意事項:
1. 由于基因結構的復雜性,并不是所有的片段都能順利合成。對于較長的片段或一些復雜結構如重復序列、高 GC 片段等,可能會需要額外的時間調整合成方案。如果發生這種情況,技術人員會及時與您聯系,告知您合成進程。
2. 所合成的基因一般克隆于通用載體中,如需克隆在客戶指定的載體中,我公司會酌情再收取一定的費用,并且交貨時間會適當延長。
六、提交的產品及資料:
1、不少于2μg的含目的基因的高純度質粒一份
2、含有重組質粒的甘油菌一份
3、基因合成報告一份
4、基因序列100%正確的原始測序圖譜一份
5、質粒圖譜及序列